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關于驗證抗體特異性五大策略盡管抗體是科學研究中常用的一種工具,但是沒有準確的科學架構來驗證抗體在不同研究方法上的特異性。據估計,在美國和全世界使用特征不明確的抗體每年分別浪費3.5億和8億美元,而這樣的抗體會導致實驗失敗或結果不可靠。IWGAV是為抗體生產商和使用者制定抗體驗證策略的組織。 抗體驗證工作組(IWGAV)是范圍內由研究方向各異的蛋白質生物學家組成的獨立工作組。IWGAV 9月19日在瑞典斯德哥爾摩披露,為滿足在抗體特異性、功能性和重復性的迫切需求,該工作組已于9月在《Nature Methods》在線發表了初步的戰略建議。“針對建立廣泛可接受的抗體驗證標準和為生物醫藥研究提供始終如一的高質量抗體,這篇文章的發表預示邁出了重要的步。”瑞典斯德哥爾摩工學院的微生物學教授兼IWGAV主席Dr. Mathias Uhlén表示。 IWGAV確定了五個支柱策略,以指導通過特定應用進行抗體驗證的方式:一是基因策略:利用CRISPR/Cas 或RNAi等技術,將對照細胞或組織中的目標基因敲除或敲低,并檢測這些對照細胞或組織中的相關信號。二是正交策略:使用非抗體依賴方法對大量樣品進行定量,并檢測基于抗體和非抗體定量間的相關性。三是獨立抗體策略:使用2種或多種可識別目標蛋白表面不同抗原決定簇的獨立抗體,并通過對比或定量分析確定特異性。四是標簽蛋白的表達:為內源性目標基因添加親和標簽或熒光蛋白標簽。利用抗體檢測方法可對來自標簽蛋白的信號進行校正。五是免疫捕獲及質譜分析(MS):免疫沈淀(IP)技術可通過使用與目標蛋白特異性結合的抗體分離出目標蛋白,其與MS分析結合(IP-MS)可識別與純化抗體直接發生相互作用的目標蛋白以及可能與目標蛋白形成復合物的蛋白。 盡管上述每一項策略都能為抗體特異性提供證據,但IWGAV建議采取多項策略來闡明抗體在不同研究應用中的特異性。發表在《Nature Methods》上的文章在抗體重復性上,還對生產商和用戶提出了建議。發表在《Nature Methods》上的提議旨在為抗體驗證和重復性標準提供科學基礎,并鼓勵建立廣泛認可的抗體綜合性使用指南。 |